镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞中基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶抑制因子3表达的影响

摘要：目的 研究不同浓度镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞NCM460中基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)表达的影响.方法 用镁钙合金制成不同浓度(体积分数10％、50％和100％)的浸提液,并将NCM460细胞制成5 × 106 L-1的细胞悬液,分为空白对照组及实验1、2、3组,空白对照组每孔加入含体积分数10％胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔高糖培养基2000 μL,实验1、2、3组每孔分别加入体积分数10％、50％及100％的镁钙合金浸提液2000 μL,分别培养1、3、5d,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3 mRNA的表达,免疫印迹法检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3蛋白表达.结果 培养1d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA、TIMP3 mRNA表达水平均显著低于空白对照组(P＜0.05);培养3、5d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平仍显著低于空白对照组(P＜0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9mRNA表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P＜0.05);培养5d后,实验3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平显著高于实验2组(P＜0.05).培养3、5d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养1d后;培养5d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平与培养3d后比较差异无统计学意义(P＞0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养3d后(P＜0.05).培养1d后,实验2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于实验1组(P＜0.05).培养3d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平显著低于对照组(P＜0.05),实验2组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著低于实验1、3组(P＜0.05).培养5d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于对照组(P＜0.05).实验1组NCM460细胞中培养3、5d后的TIMP3 mRNA表达水平均显著高于培养1d后(P＜0.05),培养5d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养3d后(P＜0.05).实验2组NCM460细胞中培养3d后的TIMP3mRNA表达水平显著低于培养1d后(P＜0.05),培养5d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3d后(P＜0.05).实验3组NCM460细胞中培养5d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3d后(P＜0.05).培养5d后,实验1组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);实验2、3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P＜0.05);实验3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与实验2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).培养5d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平均显著高于对照组(P＜0.05);实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平两两比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高浓度的镁钙合金浸提液对NCM460细胞中的MMP9及TIMP3基因表达有一定的影响,容易导致早期炎症反应的发生,其机制可能与浸提液中的钙离子浓度有关.